Pr. emeritus Jean-Pierre HERVEG MD, Universidad Catolica de Louvain
Escuela de Medicina
(Bruselas)
(in English): http://www.icampus.ucl.ac.be/SBIM2520/document/genemol/secondesemaine/transformation/transform.html

Atelier de genetica molecular SBIM 2520
Promocionado por PROMEGA NL.
ampicilina


Maritza BARCIA MACAY* (Pharmacist) and Daniel RUIZ** (Erasmus)
*Universidad de Guayaquil, Ecuador
** Universidad de Alcalá, Madrid, España, España

regresa a la segunda semana de trabajo



 

plan del dia

1. solucion de ampicilina: pesado
2. solucion de ampicilina: esterilizado y almacenamiento
3. placas de Petri: agar + ampicilina
4. prepara la siembra de la bacteria utilizando una varilla de vidrio
5. protejete del fuego!
6. esteriliza la varilla de vidrio (the rake)
7. pipetea 25 µl de la bacteria recombinante
8. siembra por esparcion la bacteria
9. mañana obtendras esto...

.......................




1. solucion de ampicilina: pesado de la ampicilina

La ampicilina debe almacenarse a -4° C y en la oscuridad.
Antes de utilizarla debe alcanzar la temperatura ambiente.

No retornes nunca reactivos usados en su caja, o frasco original.
Por lo tanto toma una alicuota pequeña de ampicilina en un tubo de ensayo pre-pesado.

Pesa y prepara para obtener una solucion de ampicilina de 50 µg / ml en agua.

Manten esta solucion en refrigeracion. m mientras la usas...............


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2. solucion de ampicilina:
;esterilizacion y almacenamiento

La esterilizacion (realizada en la camara de flujo laminar) se consigue mediante filtracion, usando una jeringa y un filtro (Millipore non-pyrogenic sterile filter 0.22 µm). El filtrado se recoje en un tubo de ensayo esteril.

Debes luego envolver estos tubos en papel de aluminio (para proteger el producto de la luz) y mantenerlos -20° C.


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3. placas de Petri: agar + ampicilina

Mira las siguientes imagenes...

prepara un agar uniforme (1.8 g de agar en polvo en 120 ml de medio LB, suficiente para 5 placas) en un erlenmeyer esteril, calientalo hasta disolverlo y luego espera hasta que la temperatura alcance los 50°C (cuando puedas cogerlo con la mano) .

Anade144 µl del tubo de ampicilina que has preparado (50 µg/ml).

Prepara 5 placas de este agar bajo la camara de flujo laminar.

Dejalas ligeramente abiertas para que se sequen, tal como se indica en la foto, abajo.

 

Esteriliza los erlenmeyer  

 Metelos en un bano de agua a 50°C

Anade 144 µl del tubo de ampicilina que has preparado (50 µg/ml). 

numera y escribe tu nombre en las 6 placas

 

 
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4. prepara el material para el sembrado de la bacteria

desinfecta tu area de trabajo con alcohol y reune el siguiente material:

pipetas de 100 y 200 ul
puntas amarillas
una placa de Petri con etanol
una varilla de vidrio (hockey stick, rake) con un soporte
un mechero bunsen


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5. protejete contra el fuego!

Cerca de ti, dispon un trozo de papel empapado en agua asi como el bidon de agua.

En el caso que se incendie la placa de Petri con el alcohol, cubrela con el papel mojado...


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6. esteriliza el asa de siembra (varilla de vidrio)

esteriliza tu varilla de vidrio mojandola primero en alcohol l y luego flameandola en la llama del mechero. Dejala entonces enfriar un momento antes de usarla. Si por accidente incendias el alcohol, ve a la parte 5...

vamos a la parte (5) para aprender como extinguir el fuego, en caso de accidente....


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7. pipetea 25 µl de la bacteria recombinante

con las ventanas cerradas, sin hablar ni respirar...


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8. siembra la bacteria

y luego dispersala con una varilla de vidrio en la superficie de la placa de agar..


dispersala como se indica (usando varias placas con diferentes volumenes de bacteria) 50, 100, 150 y 200 µl de la bacteria recombinada.


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9. mañana obtendras esto...

 

...................


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Maritza BARCIA MACAY* (Pharmacist) and Daniel RUIZ** (Erasmus)
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