Promocionado por PROMEGA NL
Universidad Catolica de Louvain, Escuela de medicine (Bruselas, Belgium)


atelier de genetica molecular
PCR de la ß-actina de raton
regresa a la primera semana de trabajo

Maritza BARCIA MACAY* (Pharmacist), Daniel RUIZ** (Erasmus), Jean-Pierre HERVEG (Emeritus)***
*Universidad de Guayaquil, Ecuador, ** Universidad de Alcalá, Madrid, España, ***Universidad Catolica de Louvain, Belgica
 

Toma la actina mRNA del GenBank

1.
Obten el gen con el inserto M12481 de GenBank.

2. Copialo y sobreponlo, puede estar en Microsoft Word, AppleWork...

3. Mete el "courrier"

4. Guardalo en un archivo.

5. Copia el cDNA y metelo en el programa McIntosh en la parte de Amplify 1,2. En muchos laboratorios se trabaja con MAC (apple), por lo tanto olvidate un momento de tu PC.



El programa permite abrir 2 tablas: La tabla de secuencia diana y la tabla del del primer o inserto (target sequence and primer list).



A tu derecha podras ver la tabla de la secuencia diana (target sequence table).

Sobrepon tu cDNA.

Para suprimir numeros, espacios y vueltas, simplemente selecciona run en el menu PCR

Para poner letras mayusculas, ve a edit.



Elegimos 2 secuencias, en letras mayusculas para la diana, la copiamos y la metemos en primera lista.

La primera fila contiene el sentido del inserto (primer). Apoya sobre -->/ y escribe sens

Cambiamos el sentido de la sequencia, mediante reverse en el menu de Sequence.

Otra vez, despues de cambiar el sentido, apoyamos sobre -->/ y escribimos anti.


En el menu Primer hay una opcion que permite experimentar con la lista elegida.

selecciona el primer inserto (primer) y elige 'Use this primer" en el menu. Una tercera tabla aparecera como inserto en uso (Primer in use).

Haz lo misma operacion para el anti-inserto (primer anti).




Ahora, en el Menu PCR selecciona Run PCR y la figura de tu izquierda aparacera en la pantalla. Te muestra que tu inserto (primers amplify) se ha amplificado a 206 nt de largo (amplimere).



Mediante una seleccion sucesiva del sentido de las flechas en azul (blue sens) o sentido en rojo (red antisens), obtendras una quinta tabla que mostrara como y donde los insertos se alinean (primers anneal).

Copia y sobrepon toda esta informacion sin modificarla.

Copia y sobrepon tus insertos en orden!



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Maritza BARCIA MACAY* (Pharmacist), Daniel RUIZ** (Erasmus), Jean-Pierre HERVEG (Emeritus)***
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