biologia molecular, Cochabamba, Bolivia, abril 2006
las ligasas
Jean-Pierre HERVEG* y Maritza BARCIA-MACAY**
*Université de Louvain, Unité GECE, Christian de DUVE Intitute of cellular Pathology (ICP), Brussels, Belgium.

plan

preguntas

1. definir ADN ligasa¿
2. ¿ Cuál es el uso en biología molecular del ADN ligasa?
3. ¿ ADN ligasas utilizan la energía, por qué y cómo la obtienen?
4. Dar un ejemplo de ligation intermolecular e intramolecular.
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Las ADN ligasas catalizan la formación de un enlace fosfodiéster entre el 5' de un fosfato y el 3' de un nucleótido. Se usan para unir covalentemente cadenas de ADN. Por ejemplo, un fragmento dentro de otro.
La DNA ligasa usada más habitualmente es la T4 DNA ligasa, que requiere ATP como cofactor.
La ligación de moléculas de ADN puede realizarse de múltiples maneras.

Por ejemplo:

Ligación intermolecular: entre dos cadenas distintas de ADN
Ligación intramolecular: entre los dos extremos de la misma cadena de ADN, dADNo lugar a un círculo




La ligación en principio se producirá o bien entre extremos romos o bien entre extremos de DNAs digeridos con la misma enzima de restricción (Eco RI)y que, por tanto, pueden aparearse. Sin embargo, en ocasiones, también pueden producirse entre moléculas digeridos con enzimas diferentes si los extremos que genran son compatibles (BamHI, BglII, Bcl ADN XhoII).



Dos moléculas digeridas con la misma enzima pueden unirse para formar un círculo, aunque también pueden adoptar dos configuraciones diferentes según la orientación en que se unan.
Si esto mismo lo hacemos con moleculas digeridas con dos enzimas adecuadas (Eco RI y Not I), podremos controlar la orientación.



En caso de no contar con enzimas adecuadas para unir las moléculas que nos interesan, aún así contamos con algunas posibilidades. Por ejemplo, el empleo de moléculas adaptadoras. Esto es, pequeñas moléculas de ADN bicatenario que se unen a los extremos del ADN mediante ligasas y que tienen una diana de restricción que nos interesa.

Otra posibilidad es la de añadir al extremo del ADN una "cola" de mononucleótidos en una de las moléculas de ADN, y del mononucleótido complementario en la otra. Esto se realiza mediante un enzima denominada polinucleótido transferasa terminal.


biologia molecular, Cochabamba, Bolivia, abril 2006
las ligasas
Jean-Pierre HERVEG* y Maritza BARCIA-MACAY**
*Université de Louvain, Unité GECE, Christian de DUVE Intitute of cellular Pathology (ICP), Brussels, Belgium.